Фенотипирование цитохрома P450

Экспериментальный метод по определению степени участия изоформ цитохрома печени в метаболизме препарата входит в панель тестов АДМЕ. Наиболее распространенными изоферментами, обеспечивющими окислительную биотрансформацию лекарств, являются: CYP1А2, CYP2С9, CYP2С19, CYP2D6 и CYP3A4. Знание особенностей метаболизма лекарственного средства определенными изоформами системы цитохрома Р450 является необходимым при прогнозировании возможных нежелательных явлений, вызванных лекарственным взаимодействием, которые могут приводить к изменению концентрации лекарственного средства или его метаболитов (включая активные или токсические метаболиты) в плазме крови и в области молекул-мишеней.

Цель данного исследования состоит в изучении вклада изоформ цитохрома 1А2, 3А4, 2С9, 2С19 и 2D6 в процесс метаболизма исследуемого препарата микросомами печени человека. Фенотипирование осуществляется путем селективного ингибирования этих ферментов специфическими препаратами: фурафиллином, кетоконазолом, сульфафеназолом, омепразолом и хинидином. Убыль тестируемого вещества в процессе 1 ч инкубации определяется с помощью ВЭЖХ-МС/МС анализа.

Краткое описание метода

Тестируемые вещества в концентрации 1 мкМ инкубируются с микросомами человека (0,5 мг/мл, BD Gentest) в присутствии НАДФН, в 2 повторах. Метаболизм изучают без добавления ингибиторов и с селективными ингибиторами изоформ цитохрома Р450 в концентрации 10 мкМ.

Реакцию останавливают во временные точки 0, 5, 15, 30, 45, 60 мин путем добавления ацетонитрила. После преципитации белков, определяют количество оставшегося тест- препарата в супернатантах с помощью ВЭЖХ-МС/МС анализа. Рассчитывают время полураспада (T1/2), клиренс in vitro (CLint) и оставшееся количество вещества (% от начального). По влиянию селективных ингибиторов на скорость исчезновения вещества делают вывод об изоформах P450, преимущественно задействованных в метаболизме.

Протокол фенотипирования цитохрома

Изоформы CYP450

1A2, 2C9, 2C19, 2D6, 3A4 (по требованию панель

изоформ может быть расширена)

Концентрация соединения

1 мкМ (по требованию)

Кофактор

НАДФН

Число повторов

2

Микросомы человека

0,5 мг/мл, BD Gentest

Метод анализа

ВЭЖХ-МС/МС

Контроли

Без кофакторов;

Специфические ингибиторы, 10 мкМ: кетоконазол (3A4), хинидин (2D6), омепразол (1A2), флувоксамин (1A2, 2C19), сульфафеназол

(2C9)

Анализируемые параметры

— Т1/2, мин, время полураспада

— CLint, мкл/мин/мг

— оставшееся количество тестируемого соединения, %

Число тестируемых

соединений

2

ДЛЯ ЗАКАЗА ИССЛЕДОВАНИЙ:

Сизюхин Андрей Владимирович

Руководитель отдела продаж R&D сервисов, доклинические исследования

E-mail: sa@chemrar.ru

Тел.: +7 (495) 925-30-74 +доб.(538)

ОТПРАВИТЬ ЗАЯВКУ

    Ajax Call Form
    Loading...
    Translate »