Определение клеточной проницаемости и активного транспорта на модели Caco-2/PGP

Экспериментальный метод по изучению клеточной проницаемости в Сасо-2 модели входит в панель тестов АДМЕ. Тест-система MultiScreen Caco-2 (Millipore Corp., USA) используется для исследований транспорта через клеточный монослой. Клетки карциномы кишечника Caco-2 морфологически и функционально похожи на барьерный эпителий кишечника и успешно применяются для оценки проницаемости и абсорбции в ЖКТ. Caco-2 клетки также имеют ряд транспортеров, включая P-гликопротеин (Pgp), и используются для изучения активного транспорта веществ.

Краткое описание метода

Исследование транспорта в направлении А-В и В-А проводится на 21-дневной культуре Сасо-2 при 1 мкM концентрации вещества в течение 2 ч. Контрольные соединения: ранитидин (низкая проницаемость), пропранолол (высокая проницаемость), родамин 123 (Pgp транспорт), циклоспорин А (ингибитор Pgp). Целостность монослоя подтверждается измерением сопротивления. Содержание вещества определяется с помощью ВЭЖХ-МС/МС.

Протокол определения клеточной проницаемости и активного транспорта на модели Сасо-2/Pgp

Пассаж клеток

10-50

Срок культивирования клеток

21 день

Концентрация соединения

Число повторов

1, 10 мкМ (по требованию)

3

Концентрация ДМСО

1 %

Время инкубации

2 ч

Метод анализа

ВЭЖХ-МС/МС

 

 

Контроли

ранитидин (низкая проницаемость), пропранолол (высокая проницаемость), родамин 123 (Pgp транспорт), циклоспорин А (ингибитор Pgp транспорт); измерение сопротивления (целостность

монослоя)

 

Анализируемые параметры

— Papp (см/с)- проницаемость через клеточный монослой

— индекс асимметрии транспорта (В-А/А-В)

— извлечение, %

Число соединений в плашке

7 + контроли

 

ДЛЯ ЗАКАЗА ИССЛЕДОВАНИЙ:

Сизюхин Андрей Владимирович

Руководитель отдела продаж R&D сервисов, доклинические исследования

E-mail: sa@chemrar.ru

Тел.: +7 (495) 925-30-74 +доб.(538)

ОТПРАВИТЬ ЗАЯВКУ

    Ajax Call Form
    Loading...
    Translate »