Определение клеточной проницаемости и активного транспорта на модели Caco-2/PGP
Экспериментальный метод по изучению клеточной проницаемости в Сасо-2 модели входит в панель тестов АДМЕ. Тест-система MultiScreen Caco-2 (Millipore Corp., USA) используется для исследований транспорта через клеточный монослой. Клетки карциномы кишечника Caco-2 морфологически и функционально похожи на барьерный эпителий кишечника и успешно применяются для оценки проницаемости и абсорбции в ЖКТ. Caco-2 клетки также имеют ряд транспортеров, включая P-гликопротеин (Pgp), и используются для изучения активного транспорта веществ.
Краткое описание метода
Исследование транспорта в направлении А-В и В-А проводится на 21-дневной культуре Сасо-2 при 1 мкM концентрации вещества в течение 2 ч. Контрольные соединения: ранитидин (низкая проницаемость), пропранолол (высокая проницаемость), родамин 123 (Pgp транспорт), циклоспорин А (ингибитор Pgp). Целостность монослоя подтверждается измерением сопротивления. Содержание вещества определяется с помощью ВЭЖХ-МС/МС.
Протокол определения клеточной проницаемости и активного транспорта на модели Сасо-2/Pgp
|
Пассаж клеток |
10-50 |
|
Срок культивирования клеток |
21 день |
|
Концентрация соединения Число повторов |
1, 10 мкМ (по требованию) 3 |
|
Концентрация ДМСО |
1 % |
|
Время инкубации |
2 ч |
|
Метод анализа |
ВЭЖХ-МС/МС |
|
Контроли |
ранитидин (низкая проницаемость), пропранолол (высокая проницаемость), родамин 123 (Pgp транспорт), циклоспорин А (ингибитор Pgp транспорт); измерение сопротивления (целостность монослоя) |
|
Анализируемые параметры |
— Papp (см/с)- проницаемость через клеточный монослой — индекс асимметрии транспорта (В-А/А-В) — извлечение, % |
|
Число соединений в плашке |
7 + контроли |
ДЛЯ ЗАКАЗА ИССЛЕДОВАНИЙ:
Сизюхин Андрей Владимирович
Руководитель отдела продаж R&D сервисов, доклинические исследования
E-mail: sa@chemrar.ru
Тел.: +7 (495) 925-30-74 +доб.(538)