Определение клеточной проницаемости на модели Сасо-2(без PGP)
Экспериментальный метод по изучению клеточной проницаемости в Сасо-2 модели входит в панель тестов АДМЕ. Тест-система MultiScreen Caco-2 (Millipore Corp.) используется для исследований транспорта через клеточный монослой. Клетки карциномы кишечника Caco2 морфологически и функционально похожи на барьерный эпителий кишечника и успешно применяются для оценки проницаемости и абсорбции в ЖКТ, а также для изучения активного транспорта веществ.
Краткое описание метода
Исследование транспорта в апикально-базолатеральном (А-В) и базолатеральноапикальном (В-А) направлениях проводится на 21-дневной культуре Сасо-2 в течение 2 ч с веществом в концентрации 1 мкM. Контрольные соединения: ранитидин (низкая проницаемость), пропранолол (высокая проницаемость), по требованию могут использоваться дополнительные контроли. Целостность монослоя подтверждается измерением трансэпителиального электрического сопротивления (TEER) с помощью вольтомметра. Содержание вещества определяется с помощью ВЭЖХ-МС/МС.
Протокол определения клеточной проницаемости на модели Сасо-2
|
Пассаж клеток |
10-50 |
|
Срок культивирования клеток |
21 день |
|
Концентрация соединения Число повторов |
1, 10 мкМ (по требованию) 3 |
|
Концентрация ДМСО |
1 % |
|
Время инкубации |
2 ч |
|
Метод анализа |
ВЭЖХ-МС/МС |
|
Контроли |
Ранитидин(низкая проницаемость); Пропранолол (высокая проницаемость); Измерение сопротивления (целостность монослоя – 3 кОм<TEER) |
|
Анализируемые параметры |
— Papp (см/с) — проницаемость через клеточный монослой — индекс асимметрии транспорта (В-А/А-В) — извлечение, % |
|
Число тестируемых соединений |
14 + 2 контроля |
ДЛЯ ЗАКАЗА ИССЛЕДОВАНИЙ:
Сизюхин Андрей Владимирович
Руководитель отдела продаж R&D сервисов, доклинические исследования
E-mail: sa@chemrar.ru
Тел.: +7 (495) 925-30-74 +доб.(538)