Определение мембранной проницаемости тестируемых соединений (PAMPA)
Для веществ, действие которых направлено на внутриклеточные мишени, а также для предсказания оральной биодоступности и фармакокинетических свойств потенциальных лекарственных препаратов очень важно иметь данные об их мембранной проницаемости. PAMPA — parallel artificial membrane permeability assay
— модель проникновения через искусственные липидные мембраны, которая служит для предсказания пассивной проницаемости соединения через эпителиальные клетки.
Краткое описание метода
Для более точного предсказания оральной абсорбции методом PAMPA проницаемость определяют при 2 различных характерных для ЖКТ рН — 7,4 и 5,0. Используется 96-луночный планшет (Pion Inc.), составленный из верхней (акцепторной) и нижней (донорной) частей, которые разделяются летицин-фосфолипидным бислоем на фильтре, моделирующем клеточную мембрану. Вещество в универсальном буфере с заданным рН добавляется в нижний компартмент планшета, а в верхний добавляется чистый буфер, далее обе части совмещаются и инкубируются 15-20 ч при комнатной температуре, чтобы соединение перераспределялось между двумя отсеками и мембраной. Донорные и акцепторные образцы анализируются на спектрофотометре или методом ВЭЖХ-МС/МС. Рассчитывается проницаемость и фактор удерживания в липидном бислое.
Протокол определения пассивной мембранной проницаемости тестируемых соединений (РАМРА)
|
Метод анализа |
спектрофотометрия (Infinite М200 PRO, Tecan), ВЭЖХ- МС/МС |
|
Набор |
PAMPA Sandwich, P/N 110163 (pION Inc, MA) |
|
Буфер |
универсальный буфер pION Inc с 1 % ДМСО. рН=7.4, рН=5.0 |
|
Липиды |
BLM-0, P/N 110615 (pION Inc, MA) или Porcine polar brain lipids, 141101 (Avanti Polar Lipids, Inc) |
|
Концентрация вещества в донорной лунке |
100 uM |
|
Количество повторов |
ВЭЖХ-МС/МС: 3 повтора; спектрофотометрия: 2 повтора |
|
Контроли |
контроль растворителя; по 2 контроля с высокой и низкой проницаемостью (по выбору). низкая проницаемость: ранитидин, атенолол, амоксициллин; высокая проницаемость: верапамил, пропранолол, кетопрофен, метопролол |
|
Анализируемые параметры |
— проницаемость; Pe (10-6 ), см/с — фактор удерживания в липидном бислое, R |
|
Формат |
11 соединений+4 контроля, 2 рН. может быть изменен по требованию |
ДЛЯ ЗАКАЗА ИССЛЕДОВАНИЙ:
Сизюхин Андрей Владимирович
Руководитель отдела продаж R&D сервисов, доклинические исследования
E-mail: sa@chemrar.ru
Тел.: +7 (495) 925-30-74 +доб.(538)