Противогрибковый препарат Bifonazole как новое противовирусное средство против SARS-CoV-2
В исследовании, опубликованном в журнале Molecular Therapy, ученые определили, что Bifonazole (бифоназол, брендовое название – Canespor) противогрибковый агент на основе имидазола, обладает высокой активностью против коронавируса тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2).
SARS-CoV-2 заражает клетки-хозяева посредством взаимодействия шиповидного (S) рецептор-связывающего домена белка (RBD) и рецепторов ангиотензинпревращающего фермента 2 (ACE2) хозяина. Следовательно, сайт связывания S…RBD-ACE2 – потенциальная мишень при разработке терапии против SARS-CoV-2. В настоящем исследовании изучалось использование «малых молекул» как терапевтических средств против SARS-CoV-2, путем выявления и сравнения эффективности таких молекул, блокирующих взаимодействия S…RBD-ACE2. Применен анализ расщепленной люциферазы для скрининга небольших молекул, ингибирующих связывание S…RBD-ACE2, основанный на бинарной технологии NanoLuc (NanoBiT), где биорепортер нанолюциферазы разделен на две части, т. е. малый BiT (SmBiT) и большой BiT (LgBiT). Обе части демонстрировали надежную конформационную стабильность, создавая идеальное разделение. В анализе связывание S…RBD-ACE2 давало сильные и стабильные люминесцентные сигналы нанолюциферазы при добавлении субстрата коэлентеразина (CTZ).
В общей сложности 1200 одобренных FDA лекарственных соединений библиотеки Prestwick были проверены с использованием двух методов (A и B). В методе A библиотеку соединений добавляли к комплексу LgBiT-RBD/SmBiT-ACE2 для идентификации соединений, диссоциировавших как комплекс. В методе B библиотеку добавляли к комплексу LgBiT-RBD с последующим добавлением SmBiT-ACE2 для идентификации соединений, ингибирующих взаимодействие S…RBD-ACE2.
Хиты, полученные с люминесценцией биорепортера ≤ 15 %, были исключены из анализа, а соединения с лучшими 45 хитами – дополнительно проанализированы. В общем случае, Bifonazole значительно уменьшал количество инфицированных псевдотипированных клеток VSV-S-GFP [полумаксимальная ингибирующая концентрация (IC50) = от 30 до 40 мкМ, без токсичности до 100 мкМ] и инфицированных клеток wtVSV-GFP (IC50 = от 60 до 70 мкМ). При интраназальном введении Bifonazole приводил к снижению смертности на 40% у мышей K18-ACE2, зараженных VSV-S, с аналогичными преимуществами после заражения живым SARS-CoV-2. Более того, Bifonazole продемонстрировал значительное снижение люминесценции мутантных биорепортеров RBD, что свидетельствует о существенном ингибировании вариантов SARS-CoV-2 (особенно для Omicron), которые связываются с ACE2 под действием Bifonazole.
Анализ BiFC показал дозозависимое снижение слияния клеток, экспрессирующих TMPRSS2/ACE2, и клеток почек эмбриона человека, экспрессирующих S (HEK293T), при лечении Bifonazole. Подобные эффекты наблюдались при использовании S SARS-CoV с 45% и 22% ингибированием взаимодействий SARS-CoV S RBD-ACE2 с использованием методов A и B соответственно. Это указывает на то, что Bifonazole также обладает высокой противовирусной активностью в отношении SARS-CoV. При скрининге лекарств другие имидазольные противогрибковые средства (эконазол, кетоконазол, клотримазол, оксиконазола нитрат и др.) и имидазольные противовоспалительные средства (типа трибенозида), проявили значительно меньшую эффективность. Интересно, что препарат был запатентован в 1974 году и одобрен для медицинского применения в 1983 году.
16.05.2022