Исследование эффективности in vivo на мышах в модели псориаза, вызванного имихимодом (Imiquimod, IMQ)

Описание протокола исследования эффективности экспериментального препарата in vivo на мышах в модели псориаза, вызванного имихимодом в исследовательском центре ХимРар (виварий). Изучение эффективности и фармакологических эффектов для инновационных лекарственных кандидатов (экспериментальных препаратов) в модели ин виво.

1. Цель исследования

• Оценить терапевтическую эффективность исследуемого препарата в уменьшении симптомов псориаза.
• Изучить влияние препарата на гистологические и иммунологические параметры псориазоподобного воспаления.
• Определить безопасность препарата.

Модель псориаза у мышей

• Животные:
  • Линия: BALB/c, CD-1 или C57BL/6 (часто используются для исследований кожи).
  • Пол: Самцы или самки (однородные по полу для исключения половых различий).
  • Возраст: 6-8 недель.
  • Вес: 18-25 г.
  • Количество: 8-10 мышей на группу (для обеспечения статистической мощности).
• Группы:

• • Контрольная группа (без индукции псориаза, нанесение нейтрального крема).
  • Группа с индуцированным псориазом без лечения.
  • Группа с индуцированным псориазом и лечением (1–3 дозы).
  • (Опционально) Группа с лечением стандартным препаратом сравнения (например, кортикостероидом).

Индукция псориаза

• Метод: Нанесение 5% крема с имихимодом (IMQ) на кожу.
• Область нанесения: Кожа спины (предварительно депилированная) и/или ушная раковина.
• Дозировка: по 62,5 мг IMQ на 1 участок кожи (спины и/или ушной раковины) в день.
• Длительность: 5-10 дней.
• Контрольная группа: Нанесение вазелина или нейтрального крема.

Лечение препаратом

• Режим применения:
  • Препарат наносится тонким слоем на пораженные участки кожи или водится энтерально/ парэнтерально в соответствии с терапевтической схемой.
• Длительность лечения: 5-10 дней (параллельно с нанесением IMQ).
• Контроль лечения: Группа с IMQ без лечения получает только нейтральный крем или плацебо.

Оценка параметров

• Клиническая оценка:
  • Ежедневная оценка степени тяжести псориаза по шкале PASI (адаптированной для мышей модели):
    • Эритема (0-4 балла): 0 — отсутствует, 4 — сильная.
    • Шелушение (0-4 балла): 0 — отсутствует, 4 — выраженное.
    • Утолщение кожи (0-4 балла): 0 — отсутствует, 4 — сильное.
  • Измерение толщины ушной раковины с помощью калипера.
• Гистологический анализ:
  • После завершения эксперимента мышей эвтаназируют, и образцы кожи фиксируют в 10% формалине.
  • Гистологические срезы окрашивают гематоксилином и эозином для оценки:
    • Толщины эпидермиса.
    • Наличия микроабсцессов Мунро.
    • Инфильтрации иммунными клетками (нейтрофилы, лимфоциты).
  • Иммуногистохимическое окрашивание для выявления маркеров пролиферации (Ki-67) и дифференцировки кератиноцитов (Keratin 16).
• Биохимические и иммунологические маркеры:
  • Забор крови для анализа сыворотки на уровни цитокинов (IL-17, IL-23, TNF-α, IFN-γ) с помощью ELISA.
• Масса тела и общее состояние:
  • Ежедневный мониторинг массы тела для оценки токсичности.
  • Наблюдение за поведением, аппетитом и состоянием кожи.

Статистический анализ

• Данные анализируются с использованием программного обеспечения (например, GraphPad Prism).
• Методы:
  • Сравнение между группами: t-тест, U-тест или ANOVA с пост-хок тестами (например, Тьюки).
• Уровень значимости: p < 0,05.

Ожидаемые результаты

• Клинические:
  • Уменьшение эритемы, шелушения и утолщения кожи в группе, получавшей препарат совместно с IMQ.
• Гистологические:
  • Снижение толщины эпидермиса и инфильтрации иммунными клетками тканей кожи, частоты встречаемости микроабсцессов Мунро.
• Иммунологические:
  • Снижение уровней провоспалительных цитокинов (IL-17, IL-23, TNF-α).
• Безопасность:
  • Отсутствие значительных изменений массы тела и общего состояния животных.

• Результаты исследования позволят сделать выводы об эффективности и безопасности препарата в лечении псориаза и схожих по патогенезу заболеваний.
• Полученные данные могут быть использованы для дальнейших доклинических и клинических исследований.

Протокол исследования может быть адаптирован в зависимости от целей исследования.