Тест Эймса
С помощью теста Эймса (англ. Ames test) исследуется мутагенная активность соединений in vitro. Для проведения первичной оценки мутагенной активности вновь разрабатываемых лекарственных препаратов целесообразно использовать тест Эймса на индикаторных штаммах сальмонелл, широко применяемый для этих целей во всем мире. Учет генных мутаций с использованием бактерий Salmonella typhimurium входит в необходимый минимальный набор методов для оценки мутагенности. Наличие мутагенного эффекта у исследуемых соединений учитывают по индукции ими обратных мутаций (реверсий) к прототрофности по гистидину.
Положительный ответ в тесте Эймса позволяет утверждать о наличии мутагенной активности у испытуемого вещества. Мутагенный потенциал может анализироваться в присутствии/отсутствии метаболической активности (фракции S9 печени) для выявления промутагенов и активных мутагенов. Используют штаммы TA100 и TA1535 бактерий Salmonella typhimurium для детектирования точечных мутаций и TA98 и TA1537 для детектирования мутаций смещения рамки считывания.
Краткое описание метода
Гистидин-зависимые бактерии в количестве 107 экспонируются в нескольких (2, 3 или 6) концентрациях тестируемого соединения, также как позитивный (специфический мутаген) и негативный (2% ДМСО) контроли, в течение 90 минут в среде, содержащей достаточное количество гистидина для поддержания двух клеточных делений. После, экспонируемые культуры разбавляются pH-индикаторной средой, лишенной гистидина, и переформатируются в 384-луночные планшеты. В течение 2-х дней клетки, которые прошли через реверсию гистидиновой прототрофии, вырастут в колонии. Метаболизм бактериальных колоний понижает pH среды, таким образом, изменяя цвет конкретной лунки. Лунки, содержащие колонии ревертантов, подсчитываются для каждой дозы и сравниваются с нулевой дозой (среда без препарата). Каждая доза делается в трех повторах. Статистически достоверное (tкритерий) и дозозависимое увеличение числа колоний ревертантов в присутствии препарата относительно базового уровня естественных мутаций свидетельствует о том, что вещество является мутагенным в тесте Эймса MPF™ 98/100/1535/1537.
Протокол проведения теста Эймса (MPF™98/100/1535/1537)
|
Метод |
Ames MPF 98/100/1535/1537 (XENOMETRIX) |
|
Штаммы |
Salmonella typhimurium TA98, TA100, TA1535 и TA1537 |
|
Число повторов |
3 |
|
Метаболизирующая система |
Индуцированная фракция S9 печени крысы |
|
Метод анализа |
Поляризация флуоресценции |
|
Контроли |
Контроль растворителя (2% ДМСО); Позитивный контроль (без фракции S9): 4- нитрохинолин-N-оксид (4-NQO)/TA100, 2- нитрофлуорен (2-NF)/TA98, N4-аминоцитидин (AC)/TA1535, 9-аминоакридин (9-AA)/TA1537; Позитивный контроль (с фракцией S9) — 2- аминоантрацен |
|
Анализируемые параметры |
Подсчет числа колоний реверантов. Достоверность отличия от базового уровня (t-тест) |
|
Формат |
1 соединение в 6 концентрациях; 2 соединения в 3 концентрациях; 3 соединения в 2 концентрациях; 6 соединений в 1 концентрации; |
ДЛЯ ЗАКАЗА ИССЛЕДОВАНИЙ:
Сизюхин Андрей Владимирович
Руководитель отдела продаж R&D сервисов, доклинические исследования
E-mail: sa@chemrar.ru
Тел.: +7 (495) 925-30-74 +доб.(538)