Тест на определение стабильности в гепатоцитах

Для разработки лекарственных веществ решающее значение имеет исследование метаболизма препарата. Печень – это наиболее важное место метаболизма лекарственных препаратов в организме.

Для оценки метаболизма в печени используется тест по экспериментальному определению стабильности в культуре гепатоцитов, которая представляет собой модельную систему для изучения фармакокинетического профиля лекарственных препаратов in vitro. В первичной культуре криоконсервированные гепатоциты, как и свежевыделенные, сохраняют полную энзиматическую активность (фазы I и II), характерную для интактных клеток печени.

Исследования метаболической стабильности позволяют in vitro классифицировать соединения в зависимости от периода полуэлиминации или внутреннего клиренса и предотвращают более дорогостоящие исследования in vivo для неустойчивых соединений. Использование гепатоцитов разных видов млекопитающих может быть использовано для выявления межвидовых различий.

Краткое описание метода

Тестируемые соединения в конечной концентрации 1 мкМ инкубируются с пулом криоконсервированных гепатоцитов, полученных из печени разных видов млекопитающих, при осторожном перемешивании во влажной атмосфере при 37˚C и 5% CO2. Реакцию останавливают добавлением холодного ацетонитрила в 6-ти временных точках в течение 4-х часов (0, 0.5, 1, 2, 3 и 4 ч), затем из проб отбираются аликвоты, которые анализируются методом ВЭЖХ-МС/МС. Для каждого из тестируемых соединений инкубацию проводят в трех повторах в каждой временной точке. По кинетике убыли тестируемого вещества в процессе инкубации рассчитывают время полураспада (T1/2), клиренс in vitro (CLint) и оставшееся количество вещества (% от начального). Контрольные вещества – пропранолол (фаза I метаболизма) и 7-гидроксикумарин (фаза II метаболизма). Также, включен контроль стабильности соединений в инкубационной среде при отсутствии энзиматической активности гепатоцитов. Финальная концентрация ДМСО — 0.2%.

Протокол теста на определение стабильности в гепатоцитах