Тест на определение стабильности в S9 фракции микросом печени

Экспериментальный метод по изучению метаболической стабильности в S9 фракции печени является важным тестом панели АДМЕ. S9 фракция печени содержит микросомы и цитозоль клеток с основными метаболическими ферментами как I, так и II фаз метаболизма: цитохромы Р450, флавин-монооксигеназы, альдегид оксидазы, глутатион трансферазы, моноамин оксидазы, УДФ (уридин 5 дифосфат- глюкоронозилтрансферазы) и другие. Доступность S9 фракций, получаемых из печени различных видов млекопитающих, делает их одним из широко используемых средств для оценки метаболизма новых химических соединений:предсказание клиренса, возможных метаболитов, идентификация цитохромов, отвечающих за метаболизм исследуемого препарата. При изучении стабильности в S9 фракции печени добавляется использование таких кофакторов, как УДФГК (уридиндифосфоглюкуроновая кислота) и ФАФС (3′- фосфоаденозин-5′-фосфосульфат, PAPS) для расширенного исследования метаболизма фазы II.

Краткое описание метода

Данный протокол описывает процедуру изучения метаболизма веществ в S9 фракции печени крыс, собак и человека. 1 мкM тест-препаратов инкубируют с S9 фракцией печени на шейкере при 37˚C в присутствии кофакторов. Реакции останавливают во временные точки 0, 10, 20, 30, 45 и 60 мин путем добавления ацетонитрила. После преципитации белков, определяют количество оставшихся тест-препаратов в супернатантах с помощью ВЭЖХМС/МС. Инкубация проводится в двух повторах. По кинетике убыли тестируемого вещества в процессе инкубации рассчитывают время полураспада (T1/2), клиренс in vitro (CLint) и оставшееся количество вещества (% от начального). Контрольные вещества – верапамил и 7- гидроксикумарин.

Протокол теста на определение стабильности в S9 фракции печени

Вид S9 фракции печени

человека, крысы, собаки, мыши, примата (по

требованию)

Концентрация S9 фракции

Кофактор

1 мг/мл

НАДФН, УДФГК, ФАФС

Концентрация соединения

Число повторов

1 мкМ (по требованию)

2

Концентрация ДМСО

0.01 %

Временные точки

0; 10, 20; 30, 45, 60 мин

Метод анализа

ВЭЖХ-МС/МС

 

Контроли

— верапамил (I)

— 7-гидроксикумарин (II)

— стабильность без кофакторов

 

Анализируемые параметры

— t1/2, мин, время полураспада

— CLint, мл/мин/кг, клиренс

— оставшееся количество тестируемого соединения,

%

Число соединений на один вид S9 фракции

10 + 2 контроля

ДЛЯ ЗАКАЗА ИССЛЕДОВАНИЙ:

Сизюхин Андрей Владимирович

Руководитель отдела продаж R&D сервисов, доклинические исследования

E-mail: sa@chemrar.ru

Тел.: +7 (495) 925-30-74 +доб.(538)

ОТПРАВИТЬ ЗАЯВКУ

    Ajax Call Form
    Loading...
    Translate »