Определение мембранной проницаемости тестируемых соединений (PAMPA)

Для веществ, действие которых направлено на внутриклеточные мишени, а также для предсказания оральной биодоступности и фармакокинетических свойств потенциальных лекарственных препаратов очень важно иметь данные об их мембранной проницаемости. PAMPA — parallel artificial membrane permeability assay

— модель проникновения через искусственные липидные мембраны, которая служит для предсказания пассивной проницаемости соединения через эпителиальные клетки.

Краткое описание метода

Для более точного предсказания оральной абсорбции методом PAMPA проницаемость определяют при 2 различных характерных для ЖКТ рН — 7,4 и 5,0. Используется 96-луночный планшет (Pion Inc.), составленный из верхней (акцепторной) и нижней (донорной) частей, которые разделяются летицин-фосфолипидным бислоем на фильтре, моделирующем клеточную мембрану. Вещество в универсальном буфере с заданным рН добавляется в нижний компартмент планшета, а в верхний добавляется чистый буфер, далее обе части совмещаются и инкубируются 15-20 ч при комнатной температуре, чтобы соединение перераспределялось между двумя отсеками и мембраной. Донорные и акцепторные образцы анализируются на спектрофотометре или методом ВЭЖХ-МС/МС. Рассчитывается проницаемость и фактор удерживания в липидном бислое.

Протокол определения пассивной мембранной проницаемости тестируемых соединений (РАМРА)

Метод анализа

спектрофотометрия (Infinite М200 PRO, Tecan), ВЭЖХ-

МС/МС

Набор

PAMPA Sandwich, P/N 110163 (pION Inc, MA)

Буфер

универсальный буфер pION Inc с 1 % ДМСО. рН=7.4,

рН=5.0

Липиды

BLM-0, P/N 110615 (pION Inc, MA) или Porcine polar

brain lipids, 141101 (Avanti Polar Lipids, Inc)

Концентрация вещества в донорной лунке

100 uM

Количество повторов

ВЭЖХ-МС/МС: 3 повтора;

спектрофотометрия: 2 повтора

 

 

Контроли

контроль растворителя; по 2 контроля с высокой и низкой проницаемостью (по выбору).

низкая проницаемость: ранитидин, атенолол, амоксициллин;

высокая проницаемость: верапамил, пропранолол,

кетопрофен, метопролол

Анализируемые параметры

— проницаемость; Pe (10-6 ), см/с

— фактор удерживания в липидном бислое, R

Формат

11 соединений+4 контроля, 2 рН.

может быть изменен по требованию

 

ДЛЯ ЗАКАЗА ИССЛЕДОВАНИЙ:

Сизюхин Андрей Владимирович

Руководитель отдела продаж R&D сервисов, доклинические исследования

E-mail: sa@chemrar.ru

Тел.: +7 (495) 925-30-74 +доб.(538)

ОТПРАВИТЬ ЗАЯВКУ

    Ajax Call Form
    Loading...
    Translate »